WA 0813-8792-7402 | JUAL OC/BGP (Osteocalcin) ELISA Kit
Osteocalcin (OC) adalah cytokine dengan berat molekul 58 kDa yang disekresikan oleh osteoblast dalam matrix tulang dan darah, Osteocalcin memiliki 49 asam amino, tiga diantaranya γ-carboxyglutamic acid (Gla) atau BGP sehingga Osteocalcin dikenal juga sebagai protein γ-carboxyglutamic acid (Gla)/BGP tulang.
Sintesis Osteocalcin distimulasi oleh vitamin D namun untuk menghasilkan γ-carboxyglutamic acid (Gla) bergantung dengan vitamin K. 70-80% hasil sintesis Osteocalcin berikatan dengan mineralisasi matrix tulang dan 20-30% memasuki sirkulasi sebagai intact osteocalcin (iOC). Sirkulasi osteocalcin secara cepat terurai menjadi fragmen-fragmen kecil (fOC).
Osteocalcin (OC) disintesis oleh osteoblas yang mengikat hidroksiapatit dalam matriks tulang. Osteocalcin memiliki fungsi dalam mengatur remodeling tulang melalui mekanisme umpan balik negatif, Osteocalcin merupakan faktor endokrin dalam mengatur homeostasis glukosa. Osteocalcin yang memiliki rendah dikaitkan dengan peningkatan risiko patah tulang. Osteocalcin memiliki irama sirkardian dan lebih tinggi di pagi hari. Osteocalcin diekskresi oleh filtrasi glomerulus dan konsentrasinya meningkat ketika ketika filtrasi glomerulus menurun.
Dikarenakan osteocalcin diproduksi oleh osteoblas, osteocalcin sering digunakan sebagai penanda untuk proses pembentukan tulang. Telah diketahui bahwa kadar osteocalcin serum lebih tinggi berkorelasi relatif baik dengan peningkatan kepadatan mineral tulang selama pengobatan dengan obat pembentukan tulang anabolik untuk osteoporosis, seperti teriparatide. Selain itu banyak penelitian osteocalcin digunakan sebagai biomarker pendahuluan tentang efektivitas obat yang diberikan pada pembentukan tulang. Misalnya, penelitian yang bertujuan untuk mempelajari efektivitas glikoprotein yang disebut laktoferin pada pembentukan tulang menggunakan osteocalcin sebagai ukuran aktivitas osteoblas.
PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list Osteocalcin ELISA kit merk Elabscience Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual Osteocalcin kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human Osteocalcin ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 0.75 ng/mL
●Detection Range:1.25-80 ng/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Osteocalcin dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Osteocalcin. Sampel (atau Standar) dan antibodi pendeteksi biotinilasi khusus untuk Human Osteocalcin juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Osteocalcin akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Osteocalcin, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Osteocalcin. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Osteocalcin sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Blackwell. 2009. Biomarkers of Bone Turnover. Int J Clin Pract CME. 63(1): 19-26.
Coates, P. 2013. Bone Turnover Markers. Australian Family Physician; 42(5): 285-287
Lee, A. J.; Hodges, S dan Eastell, R. 2000. Measurement of Osteocalcin. Ann Clin Biochem; 37: 432-446.
0 Komentar