WA 0813-8792-7402 | Jual Toll-like receptor 4 (TLR4) ELISA Kit
Toll-like receptor 4 adalah salah satu jenis protein yang ada pada manusia, protein ini dikodekan oleh gen TLR4. TLR4 adalah protein transmembran yang termasuk ke dalam anggota Toll like receptor yang termasuk dalam pattern recognition receptor (PRR). Aktivasinya menyebabkan aktifnya jalur pensinyalan intraseluler NF-ĪŗB dan produksi sitokin inflamasi yang bertanggung jawab untuk mengaktifkan sistem kekebalan tubuh bawaan.
Toll-like receptor 4 memiliki kemampuan untuk mengenali lipopolisakarida (LPS) yaitu komponen yang ada di banyak bakteri Gram negatif dan pada beberapa bakteri Gram positif. Toll-like receptor 4 juga dapat mendeteksi beberapa protein virus, polisakarida, dan berbagai protein endogen seperti lipoprotein densitas rendah, beta-defensin, dan protein heat shock. Toll-like receptor 4 memliki nama lain yaitu CD284 (cluster diferensiasi 284). Berat molekul Toll-like receptor 4 adalah sekitar 95 kDa.
Toll-like receptor 4 berfungsi dalam pengenalan patogen dan aktivasi kekebalan tubuh bawaan. Toll-like receptor 4 mengenali pola molekuler yang berhubungan dengan patogen yang diekspresikan pada antigen dan menjadi perantara produksi sitokin yang diperlukan untuk meningkatkan daya tahan tubuh. Reseptor TLR paling banyak diekspresikan dalam plasenta, dan pada subpopulasi myelomonocytic dari leukosit.
Toll-like receptor 4 bekerja sama dengan LY96 dan CD14 untuk menjadi perantara transduksi sinyal yang diinduksi oleh lipopolisakarida yang ditemukan pada sebagian besar bakteri gram negatif. Toll-like receptor 4 merespons sinyal dengan membentuk kompleks menggunakan domain berulang kaya leukosit ekstraseluler dan domain toll / interleukin-1 reseptor intraseluler. Stimulasi lipopolisakarida menginduksi serangkaian interaksi dengan beberapa protein aksesori yang membentuk kompleks Toll-like receptor 4 pada permukaan sel.
PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list Toll-like receptor 4 ELISA kit merk Elabscience Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual Toll-like receptor 4 kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human Toll-like receptor 4 ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 18.75 pg/mL.
●Detection Range: 31.25-2000 pg/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Toll-like receptor 4 dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Toll-like receptor 4. Sampel (atau Standar) dan antibodi pendeteksi biotinilasi khusus untuk Human Toll-like receptor 4 juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Toll-like receptor 4 akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Toll-like receptor 4, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Toll-like receptor 4. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Toll-like receptor 4 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100Ī¼L setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 Ī¼L larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350Ī¼L wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100Ī¼L larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90Ī¼L Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50Ī¼L Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Brubaker, S. W., Bonham, K. S., Zanoni, I., Kagan, J. C. 2015. Innate immune pattern recognition: a cell biological perspective. Annual Review of Immunology. 33: 257–90.
Vaure, C, Liu Y. 2014. A comparative review of toll-like receptor 4 expression and functionality in different animal species. Frontiers in Immunology. 5: 316.
0 Komentar