WA 0813-8792-7402 | Jual Interleukin 8 (IL-8) ELISA Kit
Interleukin8 (IL-8) adalah hormon golongan kemokina yang berbentuk polipeptida dengan massa sekitar 8-10 kDa yang berfungsi untuk proses dasar, pengikatan heparin, peradangan dan perbaikan jaringan. Interleukin 8 dibuat oleh berbagai macam sel, termasuk monosit, neutrofil, sel T, fibroblas, sel endotelial dan sel epitelial.
Interleukin 8 merupakan salah satu komponen seluler yang sangat penting tertama dalam proses perpindahan neutrofil ke bagian tubuh yang terkena inflamasi sebgai proses penyembuhan infeksi. Hal ini terkait dengan salah satu fungsi Intereukin 8 dalam sel yaitu sebagai kemoatraktan (pemicu sel kekebalan ke tempat infeksi) dan aktivator utama bagi neutrofil.
Gen penyandi Interleukin 8 dalam sel leukosit mulai aktif mengekspresikan Interleukin 8 setelah muncul sinyal induksi oleh endotoksin yang berupa lipopolisakarida bakteri patogen yang menempel pada sel epitel kelenjar susu. Semakin tinggi kandungan lipopolisakarida maka kadar Interleukin 8 yang terekspresi juga semakin meningkat dalam cairan tubuh sebagai bukti adanya aktivitas seluler untuk menghilangkan antigen.
Ketika Interleukin 8 berkatan dengan resetornya maka timbul snyal komunikasi molekuler proteoglikan pada sel endotel pembuluh darah dan protein matriks ekstraseluler dalam jaringan, selanjutnya Interleukin 8 dibawa masuk oleh endotel dpindahan ke permukaan lumen yang diperlihatkan kepada neutrofil kemudian menstimulasi migrasi neutrofil melintas sel endotel menuju tempat terjadinya inflamasi sekaligus mengaktifkan makrofag untuk proses menghilangkan patogen. Kondisi peningkatan kosentrasi dan penyebaran Interleukin 8 terjadi dalam aliran darah sebagai respon lokal dan sistemik tubuh.
Produksi Interleukin 8 berlebihan memicu penyakit peradangan, seperti asma, leprosy, psoriasis dan lain-lain. Interleukin 8 juga dapat mmeicu perkembangan tumor sebagai salah satu efek angiogenik yang ditimbulkan. Sesaat setelah terpicu, neutrofil menjadi aktif dan berubah bentuk karena aktivasi integrin dan sitoskeleton aktin.
Dalam penelitian, Interleukin 8 digunakan untuk melihat proses-proses inflamasi di dalam tubuh. Sampel yang biasanya diuji umumnya pada manusia dan juga hewan uji seperti tikus dan mencit. PT. Indogen sebagai disttibutor ELISA Kt terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut ini merupakan list ELISA Kit dengan marker Interleukin 8 :
Spesifikasi untuk Human Interleukin 8 ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 4.69pg/mL.
●Detection Range: 7.81-5000pg/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Interleukin 8 Manusia dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah dicoating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Interleukin 8 Manusia. Sampel (atau Standar) dan antibodi pendeteksi biotinilasi khusus untuk Interleukin 8 Manusia juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Interleukin 8 manusia akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Interleukin 8, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Interleukin 8. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Interleukin 8 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Mukaida, N. 2003. Pathophysiological roles of interleukin-8/CXCL8 in pulmonary disease. J Physiol Lung Cell Mol Physiol 284 : L566-L577.
Yao, J, Agree, Se. E. et al. 1996. Sequence variation in the bovine growth hormone gene characterized by single-strdan conformational polymership (SSCP) analysis and their association with milk production traits in Holsteins. Genetics. 144 : 1809-1816.
https://www.elabscience.com/p-human_il_8(interleukin_8)_elisa_kit-356133.html
0 Komentar