WA 0813-8792-7402 | Jual  Nuclear Factor Kappa B (NF-κB) p65 ELISA Kit

NF-κB (Nuclear Factor Kappa B) adalah kompleks protein yang mengontrol transkripsi DNA, produksi sitokin dan kelangsungan hidup sel, NF-κB ditemukan di hampir semua jenis sel hewan merupakan salah satu golongan faktor transkripsi yang berperan dalam respon seluler terhadap rangsangan seperti stres, sitokina, radikal bebas, logam berat, iradiasi ultraviolet, LDL yang teroksidasi, dan bakteri atau virus (antigen). NF-κB memainkan peran kunci dalam mengatur respon imun terhadap infeksi. Regulasi NF-κB yang terganggu dikaitkan dengan kanker, inflamasi dan penyakit autoimun, syok septik, infeksi virus, dan gangguan sistem imun. NF-κB juga terlibat dalam proses plastisitas sinaptik dan memori.


Di mamalia NF-κB memiliki beberapa jenis diantaranya adalah p50, p52, p65 (Rel-A), C-Rel, dan Rel-B, yang membentuk homo atau heterodimer dan tetap sebagai kompleks tidak aktif dengan penghambatan molekul yang disebut protein IκB dalam resting cell. Aktivasi NF-κB terjadi melalui dua jalur utama yaitu jalur kanonikal dan non-kanonikal. Jalur kanonikal mempengaruhi aktivasi NF-κB1 p50, RELA dan c-REL (yang disebut juga anggota keluarga NF-κB kanonikal), sedangkan jalur non-kanonikal mengaktifkan anggota NF-κB terikat p100, utamanya NF-κBB2 p52 dan RELB (biasa disebut anggota keluarga NF-κB non-kanonikal).

Bentuk NF-kB paling banyak yang diaktifkan oleh jalur kanonik adalah p65 dan p50, hal ini dipicu oleh aktivasi IKK yang bergantung pada NEMO, fosforilasi protein IκB diikuti dengan ubiquitinasi dan degradasi oleh proteasom yang melepaskan NF-kB p65: p50 dimer. PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list ELISA kit Nuclear Factor Kappa B p65 merk Elabscience Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual Nuclear Factor Kappa B p65 ELISA  kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.

Brand
Nomor Katalog
Deskripsi
Size
Elabscience
E-EL-H1388
Human NFKB-p65(Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit) ELISA Kit
96T
Elabscience
E-EL-M0838
Mouse NF-κB p65(Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit
96T
Elabscience
E-EL-R0674
Rat NF-κB p65(Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit
96T
Cusabio
CSB-E08787h
Human nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit
96T
Cusabio
CSB-E08789m
Mouse nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit
96T
Cusabio
CSB-E08788r
Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit
96T

Spesifikasi untuk Human Nuclear Factor Kappa B p65 ELISA Kit Elabscience

ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas:  0.10 ng/mL
●Detection Range: 0.16-10 ng/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Nuclear Factor Kappa B p65 dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.

Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Nuclear Factor Kappa B p65 juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Nuclear Factor Kappa B p65 akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Nuclear Factor Kappa B p65, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Nuclear Factor Kappa B p65. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Nuclear Factor Kappa B p65 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.

Cara Kerja

1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.

Referensi

Chen, L, F, Greene, W. C. 2004. Shaping the Nuclear Action of NF-κB. Nat Rev Mol Cell Biol ;5(5):392–401.
Christian, F., Smith, E dan Carmody, R. 2016. The Regulation of NF-κB Subunits by Phosphorylation. Cells ;5(1):12
Collins, P, Mitxitorena, I dan Carmody R. 2016. The ubiquitination of NF-κB subunits in the control of transcription. Cells ;5(2):23.