WA 0813-8792-7402 | Jual HMGB-1 ELISA Kit
HMG (High mobility group) merupakan kelompok protein yang terdapat di kromosom, berperan dalam proses transkripsi, replikasi, rekombinasi dan perbaikan DNA. Protein HMG memiliki tiga famili berdasarkan karakteristik yang dimiliki yaitu high mobility group A (HMGA), high mobility group B (HMGB) dan high mobility group N (HMGN). Pada manusia yang berperan dalam proses yang berhubungan dengan DNA adalah HMGB. HMGB memiliki tiga famili, yaitu HMGB1, HMGB2 dan HMGB3.
High Mobility Group Box 1 (HMGB1) merupakan protein HMGB yang diekskresikan hingga dewasa dan biasanya ditemukan dalam nukleus. HMGB1 pada manusia memiliki berat molekul 25 kD dan tersusun atas 215 asam amino yang berada dalam dua domain DNA bermuatan positif. Walaupun terletak di dalam nukleus namun HMGB1 dapat melakukan translokasi menuju sitosol yang kemudian disekresi menuju ekstraseluler bila terjadi inflamasi.
High Mobility Group Box 1 berfungsi sebagai sitokin proinflamasi yang dikeluarkan secara aktif oleh sistem kekebalan alami (neutrofil, monosit, makrofag dan beberapa sel tumor) namun HMGB1 juga dapat disekresikan secara pasif selama adanya kerusakan dan kematian sel. HMGB1 juga diketahui berfungsi sebagai molekul pengantar pesan intraseluler, dilepaskan dari sel tertentu ke ekstraseluler untuk berefek pada reseptor sel tertentu. Di nukleus, HMGB1 menunjang struktur kromatin melalui ikatan DNA dengan rangkaian yang nonspesifik dan terlibat dalam regulasi transkripsi gen. Secara intraseluler, HMGB1 terlibat dalam autofagi pada dsRNA / aktivasi inflamasi.
Penelitian fungsi struktural HMGB1 mengungkapkan bahwa aktivitas sitokin mengekspresikan aktivitas sitokin, sedangkan anti sitokin sendiri berperan sebagai antagonis HMGB1 spesifik, tetapi mekanismenya masih tetap belum dimengerti. PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list HMGB1 ELISA kit merk Elabscience dan Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual kit Elisa Interleukin-17 dari merk My Biosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human HMGB1 ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 7.50 pg/mL.
●Detection Range: 12.5-800 pg/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali HMGB1 Manusia dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah dicoating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human HMGB1. Sampel (atau Standar) dan antibodi pendeteksi biotinilasi khusus untuk Human HMGB1 juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human HMGB1 akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human HMGB1, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human HMGB1. Anda dapat menghitung konsentrasi Human HMGB1 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Ying S, Zhaoqiang J, Xianglei H, Min Y, Riping C, Junqiang C, et al. 2017. Serum HMGB1 as a potential biomarker for patients with asbestos-related diseases. Disease Markers. 2017:1-9.
Li, L. C, Jian, G, Jun, L. 2014. Emerging role of HMGB1 in fibrotic diseases. J Cell Mol;18(12):2331-9.
Damaiyanti W, D. 2015. Ekspresi high mobility group box 1 pada ulkus traumatikus tikus wistar dengan terapi ekstrak teripang emas. J PDGI ;64(2):95-9.
0 Komentar