WA 0813-8792-7402 | Jual Glucose transporter type 4 (GLUT-4) ELISA Kit
Glucose transporter type 4 (GLUT-4) merupakan transporter glukosa yang diatur oleh insulin, Glucose transporter type 4 ditemukan terutama pada jaringan adiposa dan otot lurik (rangka dan jantung). Glucose transporter type 4 manusia terdiri dari 509 asam amino, dan menunjukkan kemiripan asam amino sekitar 60% dengan isoform GLUT1 dan GLUT3.
Glucose transporter type 4 merupakan gologan GLUT yang peka terhadap insulin dan di ekspresikan pada membran plasma dan organel dari otot rangka, otot jantung dan jaringan adiposa untuk pengambilan glukosa yang diregulasi insulin. Tanpa adanya stimulasi insulin atau olah raga, 90% GLUT4 di sekuestrasi di dalam sel jaringan otot rangka dan adiposa dengan bentuk vesikel bermembran lipid berlapis ganda.
Pada permukaan sel, Glucose transporter type 4 memfasilitasi difusi pasif glukosa sirkulasi bila kadar glukosa menurun pada jaringan otot rangka dan adiposa. Setelah berada di dalam sel, glukosa dengan cepat terfosforilasi oleh glukokinase di hati dan heksokinase di jaringan lain untuk membentuk glukosa-6-fosfat kemudian memasuki glikolisis menjadi glikogen.
Disfungsi Glucose transporter type 4 terjadi baik dalam keadaan basal atau terhadap stimulasi insulin akan menyebabkan resistensi insulin, kemudian bisa menjadi Diabetes Melitus Tipe 2. Glucose transporter type 4 memiliki respon terhadap insulin, dengan stimulasi insulin, kerja Glucose transporter type 4 untuk memfasilitasi masuknya glukosa ke dalam jaringan adiposa ternyata dapat meningkat sampai 20-30 kali lipat dari keadaan basal.
Berbagai keadaan patologik dapat mempengaruhi kerja Glucose transporter type 4 yaitu kompartemen penyimpanan di dalam sel, eksositosis, reseptor insulin, translokasi Glucose transporter type 4, docking dan fusi Glucose transporter type 4 ke membran plasma, endositosis dan transit inter endosomal, serta aktivasi Glucose transporter type 4. PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list Glucose transporter type 4 ELISA kit merk Elabscience dan Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual kit Elisa Glucose transporter type 4 dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Glucose transporter type 4 ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 0.19 ng/mL
●Detection Range: 0.31-20 ng/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Glucose transporter type 4 dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Glucose transporter type 4. Sampel (atau Standar) dan antibodi pendeteksi biotinilasi khusus untuk Human Glucose transporter type 4 juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Glucose transporter type 4 akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Glucose transporter type 4, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Glucose transporter type 4. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Glucose transporter type 4 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Gould GW dan Holman GD. The glucose transporter family: Structure, function and tissue-specific expression. Biochem J. 1993;295,329-41.
Kaunang, H. C. P dan Wangko, S. 2010. GLUT4 Jaringan Adiposa, Fungsi dan Disfungsi. Jurnal Biomedik, Volume 2, Nomor 3, November 2010, hlm. 140-147.
Yu C, Cresswell J, Loffler MG, Bogan JS. The glucose transporter 4-regulating protein TUG is essential for highly insulinresponsive glucose uptake in 3T3-L1. J Biol Chem. 2007:282:7710-22.
0 Komentar