WA 0813-8792-7402 | JUAL Human TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit
TNF-α (Tumor necrosis factor alpha) adalah sitokin yang banyak disekresi oleh makrofaga dan memiliki banyak peran pada metabolisme seperti, apoptosis diferensiasi, metabolisme lipid, koagulasi dan proliferasi sel. TNF-α berperan dalam pertahanan dari infeksi bakteri, virus dan parasit. TNF-α diproduksi oleh makrofag dan diaktifkan oleh sel T limfosit, antigen, sel NK, dan sel mast. TNF-α biasanya tidak terdeteksi pada orang yang sehat tetapi sering ditemukan pada kondisi inflamasi dan infeksi dalam serum darah.
.
TNF-α bekerja terhadap leukosit dan endotel, menginduksi inflamasi akut pada kadar rendah karena TNF-α merupakan pirogen yang kuat.TNF-α berperan pada inflamasi sistemik pada kadar sedang.TNF-α menimbulkan kelainan patologis syok septik pada kadar yang tinggi, sebab TNF-α bersifat sitotoksik
.
Walaupun TNF-α menginduksi migrasi sel punca mesenkimal ke tempat yang diperlukan dengan mekanisme TRAIL, rasio plasma TNF-α yang tinggi menunjukkan disfungsi miokardial pasca-iskemik, sindrom metabolisme, gangguan laju filtrasi glomerulus, rasio asam urat yang tinggi, rendahnya kadar HDL, dan bersama IL-6 dapat menjadi faktor pemicu gagal jantung atau Left ventricular diastolic dysfunction. Pada hepatosit, TNF-α akan meningkatkan kadar SCAP di dalam sitoplasma dan menstimulasi sintesis trigliserida, sehingga TNF-α dianggap berperan dalam patogenesis steatosis.
TNF-α saat ini merupakan salah satu marker yang banyak diteliti karena merupakan indikator dari berbagai macam penyakit diantaranya penyakit demam berdarah dan juga kejang-kejang pada anak. PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list ELISA kit TNF-α merk Elabscience dan Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual TNF-α ELISA kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human TNF-α ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 4.69 pg/mL
●Detection Range: 7.81-500 pg/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human TNF-α dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human TNF-α juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human TNF-α akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human TNF-α, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human TNF-α. Anda dapat menghitung konsentrasi Human TNF-α sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi :
- Corallini F1, Secchiero P, Beltrami AP, Cesselli D, Puppato E, Ferrari R, Beltrami CA, Zauli G.2010. TNF-alpha modulates the migratory response of mesenchymal stem cells to TRAIL. Cellular and Molecular Life Sciences. 67 (8) : 1307-1314
- Safranow K1, Dziedziejko V, Rzeuski R, Czyzycka E, Wojtarowicz A, Bińczak-Kuleta A, Jakubowska K, Olszewska M, Ciechanowicz A, Kornacewicz-Jach Z, Machaliński B, Pawlik A, Chlubek D. 2004. Plasma concentrations of TNF-alpha and its soluble receptors sTNFR1 and sTNFR2 in patients with coronary artery disease. Tissue Antigens.;74(5):386-92.
- Aila, M., Iriana, Y, Anwar, Z, Theodorus. 2014. Kadar Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α )Sebagai Prediktor Demam Berdarah Dengue Pada Hari Ketiga. MKS, 46 (3) : 176-180
0 Komentar