WA 0813-8792-7402 | Jual JUAL Human VEGF-A (Vascular Endothelial Cell Growth Factor A) ELISA Kit
Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) adalah salah satu regulator penting pada pembentukan pembuluh darah embrio dan juga pada orang dewasa . Mamalia memiliki 5 ligan VEGF yang berbeda. Ligan ini kemudian akan berikatan dengan tiga reseptor tyrosine kinase yang kemudian dikenal sebagai VEGFR-1,-2, dan -3 demikian pula dengan co-reseptor seperti Heparan Sulphate Proteoglycan (HSPG) dan neuropillin-1 dan -2. VEGF adalah bagian dari reseptor tirosin kinase. VEGF ekstraseluler terdiri dari 750 asam membentuk 7 immunoglobulin loops. Walaupun sebagian besar VEGF terekspresi pada sel endotel, beberapa ekspresinya juga ditemukan pada sel non-endothelial. Namun fungsi utama VEGF adalah pada sistem vaskular.
Vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) adalah protein yang pada manusia yang dikodekan oleh gen VEGF. VEGF-A teraktivasi pada kondisi hipoksia yang menyebabkan stabilisasi Hipoxic inducible factor yang terletak pada promoter elemen VEGF-A. Gen VEGF-A ini adalah anggota dari VEGF dan mengkodekan protein yang sering ditemukan sebagai homodimer berhubungan dengan disulfida. VEGF-A ini adalah mitogen glikosilasi yang bekerja pada sel endotel dan memiliki berbagai efek yaitu memediasi peningkatan permeabilitas pembuluh darah, menginduksi angiogenesis, vasculogenesis, mempengaruhi pertumbuhan sel endotel, mendorong migrasi sel, dan menghambat apoptosis.
VEGF-A menunjukkan aktivitas dengan sel endotel vaskular terutama melalui interaksinya dengan reseptor VEGF -R1 dan -R2 yang ditemukan secara mencolok pada membran sel endotel. Secara in vitro, VEGF-A telah terbukti menstimulasi mitogenesis dan migrasi sel endotel. VEGF-A juga merupakan vasodilator dan meningkatkan permeabilitas mikrovaskuler dan dikenal sebagai faktor permeabilitas pembuluh darah.
VEGF-A sangat penting bagi orang dewasa saat penyembuhan organ dan penyakit yang melibatkan pembuluh darah seperti dalam penyembuhan luka, tumor angiogenesis, retinopati diabetes. Diferensiasi sel-sel endotel tergantung pada ekspresi VEGF-A dan jika tidak ada ekspresi maka dapat mengakibatkan kematian embrio. VEGF-A dibuat oleh VEGF-A120, VEGF-A164, dan VEGF-A188).
VEGF-A sangat penting dalam fungsi saraf karena sel saraf membutuhkan pasokan vaskular dan menghapus ekspresi VEGF-A dari progenitor syaraf, VEGFA dapat digunakan untuk mengobati pasien dengan kondisi neurodegeneratif dan neuropatik dan juga meningkatkan permeabilitas pembuluh darah yang akan menghentikan sawar darah-otak dan meningkatkan infiltrasi sel inflamasi. PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list ELISA kit Vascular endothelial growth factor A merk Elabscience dan Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual Vascular endothelial growth factor A ELISA kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma tissue homogenates, cell lysate dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 18.75 pg/mL
●Detection Range: 31.25-2000 pg/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Vascular Endothelial cell Growth Factor A sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100Ī¼L setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 Ī¼L larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350Ī¼L wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100Ī¼L larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90Ī¼L Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50Ī¼L Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Fearnley, G. W, Smith, G. A et al. 2013. Vascular Endothelial Growth Factor-A Regulation of Blood Vessels Sprouting in Health and Disease. OA Biochemistry 1;1(1): 5-14.
Mackenzie, Francesca, dan Ruhrberg, C. 2013.. Diverse Roles for VEGF-A in the Nervous System. Development : 1371-380
0 Komentar