WA 0813-8792-7402 | Jual CASP3 (Caspase 3) ELISA Kit
Caspase-3 merupakan salah satu jenis Caspase dan termasuk golongan caspase eksekutor yang diaktifkan oleh caspase inisiator misalnya caspase-8 dan caspase-9. Aktivasi apoptosis baik dari jalur ekstrinsik maupun intrinsik akan berujung pada aktivasi caspase-3 sebagai caspase eksekutor. Apabila caspase-3 teraktivasi maka terjadi kematian sel berupa apoptosis.
Caspase-3 dibentuk dari zymogen dan memiliki ukuran sebesar 32 kDa yang dipecah menjadi 17 kDa dan 12 kDa subunit. Ketika procaspase dibelah pada residu tertentu, heterotetramer aktif kemudian dapat dibentuk oleh interaksi hidrofobik, menyebabkan empat lembaran beta anti-paralel dari p17 dan dua dari p12 untuk bersama-sama membuat heterodimer, yang pada gilirannya berinteraksi dengan heterodimer lain.
Aktivasi Caspases secara berurutan memainkan peran sentral dalam fase eksekusi apoptosis sel. Caspase-3 berfungsi sebagai proenzim tidak aktif yang menjalani pemrosesan proteolitik pada residu aspartik untuk menghasilkan dua subunit besar dan kecil yang dimerisasi untuk membentuk enzim aktif. Caspase membelah dan mengaktifkan caspases 6 dan 7 dan Caspase-3 diproses dan diaktifkan oleh caspases 8, 9, dan 10.
Caspase-3 diaktifkan dalam sel apoptosis baik melalui jalur ekstrinsik (ligan kematian) dan intrinsik (mitokondria). Fitur zymogen dari caspase-3 diperlukan karena jika tidak diatur maka aktivitas caspase akan membunuh sel tanpa pandang bulu. Zymogen caspase-3 hampir tidak memiliki aktivitas sampai dibelah oleh inisiator caspase setelah pensinyalan apoptosis terjadi.
PT. Indogen sebagai distributor ELISA Kit terpercaya memiliki lini produk ELISA Kit yang berkualitas dengan harga yang bersaing dan proses cepat. Berikut merupakan list Caspase-3 ELISA kit merk Elabscience dan Cusabio. Selain merk tersebut juga dijual Caspase-3 ELISA kit dari merk Mybiosource, dijual kit Elisa Abcam, dijual kit Elisa Cloud Clone Corp dan dijual kit Elisa Alpco.
Spesifikasi untuk Human Caspase-3 ELISA Kit Elabscience
ELISA Kit tersebut bisa digunakan untuk sampel serum, plasma dan cairan biologi lainnya
●Sensitivitas: 0.19 ng/mL
●Detection Range: 0.31-20 ng/mL
●Spesifisitas: Kit ini mengenali Human Caspase-3 dalam sampel. Tidak ada reaktivitas silang yang signifikan
●Repeatability: Koefisien variasi : <10%.
Kit ELISA ini menggunakan prinsip Sandwich-ELISA. Microwell plate ELISA yang disediakan dalam kit ini telah di coating sebelumnya dengan antibodi spesifik untuk Human Caspase-3 juga telah ditambahkan ke dalam microwell plate tersebut. Human Caspase-3 akan bergabung dengan antibodi spesifik kemudian Conjugate Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) ditambahkan berturut-turut ke setiap microwell plate dan diinkubasi.komponen yang tidak dibutuhkan dihilangkan dengan dicuci beberapa kali. Substrat ditambahkan ke setiap well, hanya well yang mengandung Human Caspase-3, antibodi pendeteksi biotinylated dan konjugat Avidin-HRP yang akan berwarna biru. Reaksi enzim-substrat diakhiri dengan penambahan stop solution dan warnanya menjadi kuning. Optical Density (OD) diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 450 ± 2 nm. Nilai OD sebanding dengan konsentrasi Human Caspase-3. Anda dapat menghitung konsentrasi Human Caspase-3 sampel dengan membandingkan OD sampel dengan kurva standar.
Cara Kerja
1. Tentukan sumuran untuk diluent standard, blank dan sampel. Tambahkan 100μL setiap diluent standard, blank dan sampel ke dalam sumuran yang sesuai. Tutup plate dengan sealer yang disediakan dalam kit. Inkubasi selama 90 menit pada 37 derajat Celcius. Catatan: cairan harus ditambahkan ke bagian bawah microwell plate ELISA dengan baik, hindari menyentuh dinding bagian dalam dan menyebabkan busa sebanyak mungkin.
2. Tuang cairan dari masing-masing sumur, jangan dicuci. Segera tambahkan 100 μL larutan Biotinylated Detection Ab untuk masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 ° C.
3. Tuang larutan dari masing-masing sumuran, tambahkan 350μL wash buffer ke setiap sumuran. Rendam selama 1-2 menit dan aspirasi atau tuang larutan dari masing-masing sumuran dan tepuk kering di atas kertas penyerap. Ulangi langkah cuci ini 3 kali.
4. Tambahkan 100μL larutan HRP conjugate ke masing-masing sumuran. Tutup dengan plate sealer. Inkubasi selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
5. Tuang larutan dari setiap sumur, ulangi proses pencucian sebanyak 5 kali seperti yang dilakukan pada langkah 3.
6. Tambahkan 90μL Reagen Substrat ke setiap sumuran. Tutup dengan plate sealer baru. Inkubasi selama sekitar 15 menit pada suhu 37 ° C. Lindungi plate dari cahaya.
7. Tambahkan 50μL Stop Solution ke masing-masing sumur..
8. Tentukan Optical Density (nilai OD) dari setiap sumuran sekaligus dengan microplate reader yang diatur ke panjang gelombang 450 nm.
Referensi
Dwipoyono, B. 2007. Aktivitas Caspase 3 sebagai Indikator Apoptosis pada Sel Kanker Ovarium. Indonesian Journal of Cancer. 2 : 63-72.
Hidayat, A et al. 2011. Ekspresi Bcl-2 dan Caspase-3 Pascapaparan Hipoksia Hipobarik Intermiten. MKB. 43 (4) : 166-170.
Muhartono dan Subeki. 2017. Ekspresi Caspase-3 pada Kanker Payudara Tikus Setelah Pemberian Antikanker Brusein-A. GMHC. 5 (3) :189-93.
0 Komentar